28°C வெப்பநிலையில் 25 நாட்கள் அசைவற்ற வளர்ப்பிற்குப் பிறகு, *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ் நொதியானது பூஞ்சை வளர்ப்பு ஊடகத்தில் மிக உயர்ந்த செயல்பாட்டைக் காட்டியது. இந்த நொதிக்கான உகந்த pH மற்றும் வெப்பநிலை மதிப்புகள் முறையே 3.0 மற்றும் 70°C ஆகும். 40°C மற்றும் 50°C வெப்பநிலையில் 2 மணிநேர வளர்ப்பிற்குப் பிறகு, நொதியின் செயல்பாடு முறையே 68.33% மற்றும் 59.61% ஆகத் தக்கவைக்கப்பட்டது. சிட்ரேட்-பாஸ்பேட் தாங்கல் கரைசலில் (pH 7.0) 2 மணிநேர வளர்ப்பிற்குப் பிறகு, நொதியின் செயல்பாடு 100% ஆக நிலைத்திருந்தது. 10 mM MgSO₄ மற்றும் CuSO₄ சேர்ப்பது நொதியின் செயல்பாட்டை முறையே சுமார் 21% மற்றும் 35% அதிகரித்தது, அதேசமயம் NaCl, MnCl₂, KCl மற்றும் CaCl₂ ஆகியவை நொதியின் செயல்பாட்டைத் தடுத்தன. ABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தி, *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரியேட்டஸ்* NRC 620 லக்கேஸின் இயக்கவியல் அளவுருக்கள் (Km மற்றும் Vmax) முறையே 1.99 mM மற்றும் 16,217 μmol min−1 L−1 ஆக இருந்தன. ஆப்பிள் சாறு மாதிரிகளின் நொதிச் சிகிச்சையானது pH மற்றும் பாகுத்தன்மை இரண்டையும் கணிசமாகக் குறைத்தது, மேலும் இந்தக் குறைவானது சேமிப்புக் கால அதிகரிப்புடன் தொடர்புடையதாக இருந்தது. லக்கேஸ் சிகிச்சையானது ஆப்பிள் சாற்றின் மொத்த ஃபீனாலிக் உள்ளடக்கத்தில் ஒரு சிறிய குறைவை ஏற்படுத்தியது, ஆனால் ஆக்ஸிஜனேற்றத் தடுப்புச் செயல்பாட்டில் எந்தக் குறைவும் காணப்படவில்லை.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், ஆராய்ச்சியாளர்கள் உணவுத் துறையில் பசுமை உயிரித் தொழில்நுட்பத்தின் பயன்பாட்டில் கவனம் செலுத்தி வருகின்றனர். லக்கேஸ் என்பது உணவுத் துறையில் மிகவும் பயனுள்ள நொதிகளில் ஒன்றாகும். இது பழச்சாறு பதப்படுத்துதல், பேக்கிங், ஒயின் நிலைப்படுத்தல் மற்றும் உணவுப் பொருட்களின் சுவை மற்றும் மணத்தை மேம்படுத்துதல் போன்ற துறைகளில் பயன்பாடுகளைக் கொண்டுள்ளது.1பல உயர் தாவரங்களும் நுண்ணுயிரிகளும் லக்கேஸைச் சுரக்கின்றன.2மேலும், டியூட்டெரோமைசீட்ஸ், ஆஸ்கோமைசீட்ஸ் மற்றும் பேசிடியோமைசீட்ஸ் போன்ற பூஞ்சைகளாலும் லக்கேஸை உற்பத்தி செய்ய முடியும்.3லக்கேஸ் (EC 1.10.3.2) என்பது ஒரு நீல ஆக்சிடேஸ் ஆகும். இது மூன்று வெவ்வேறு தாமிர அணுக்களைக் கொண்ட ஒரு அமைப்பைப் பயன்படுத்தி மூலக்கூறு ஆக்ஸிஜனை நீராக ஒடுக்குகிறது, அதன் மூலம் பல்வேறு ஃபீனாலிக் சேர்மங்களையும் அரோமேட்டிக் அமீன்களையும் ஆக்ஸிஜனேற்றம் செய்கிறது. பழம் மற்றும் காய்கறிச் சாறுகள் உற்பத்தியின் போது, நொதியினால் ஏற்படும் மற்றும் நொதியல்லாத பழுப்பு நிறமாதல் ஆகியவை முக்கியமான பிரச்சினைகளாகும்.4இந்தப் பொருட்கள் சாற்றின் நிறம், சுவை மற்றும் நறுமணத்தைப் பாதிப்பதால், அவற்றை அகற்ற வேண்டும்.5
அனைத்துப் பழங்களிலும், ஆப்பிள்களே உலக அளவிலும் ஐரோப்பிய ஒன்றியத்திலும் அதிகம் நுகரப்படுகின்றன. 2019-ஆம் ஆண்டில், 87 மில்லியன் டன்களுக்கும் அதிகமான ஆப்பிள் உற்பத்தி, உலகளவில் மூன்றாவது இடத்தைப் பிடித்தது.6ஆப்பிள்களில் ஃபிளாவனாய்டுகள் மற்றும் காஃபிக் அமிலம், குளோரோஜெனிக் அமிலம் போன்ற ஃபீனாலிக் அமிலங்கள் உள்ளிட்ட ஏராளமான ஃபீனாலிக் சேர்மங்கள் அடங்கியுள்ளன.7ஆப்பிள் சாறு பொதுவாகத் தெளிவான வடிவில் அருந்தப்படுவதால், வடிகட்டும் செயல்முறையின்போது அதிலுள்ள ஃபீனாலிக் கூறுகளில் ஏறத்தாழ 50% முதல் 90% வரை இழக்கப்படுகின்றன.8தற்காலத்தில், நுகர்வோர் அதிக பாலிஃபீனால் உள்ளடக்கம் கொண்ட கலங்கலான ஆப்பிள் சாறு போன்ற, குறைந்தபட்சம் பதப்படுத்தப்பட்ட தயாரிப்புகளையே தேர்ந்தெடுக்க முனைகின்றனர். இருப்பினும், அதன் அதிக ஃபீனால் உள்ளடக்கம் காரணமாக, இந்த வகை ஆப்பிள் சாறு நிறமாற்றம் மற்றும் கருமையாவதற்கு குறிப்பாக எளிதில் உள்ளாகிறது.9ஆப்பிள் சாறு கருமையாவதைக் குறைக்க அல்லது தடுக்க, 60–90°C வெப்பநிலையில் செய்யப்படும் பாஸ்டரைசேஷன் போன்ற வெப்பச் சிகிச்சை முறைகள் உட்பட பல்வேறு தொழில்நுட்பங்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.10இருப்பினும், Sauceda-Gálvez இன் ஆராய்ச்சியின் படி11வெப்பச் செயலாக்கம், எளிதில் ஆவியாகக்கூடிய வேதிப்பொருட்களை அழித்து, ஆப்பிள் சாற்றின் சுவை மற்றும் மணத் தன்மைகளைப் பாதிக்கக்கூடும். வெப்பச் செயலாக்க முறைகளுக்கு மாற்றாக, மீ உயர் அழுத்த கார்பன் டை ஆக்சைடு, புற ஊதாக் கதிர்வீச்சு, மீயொலி, உயர் நீர்நிலை அழுத்தம் அல்லது உயர் அழுத்த ஒருபடித்தாக்கல் போன்ற முறைகள் உள்ளன.12இந்தத் தொழில்நுட்பங்களின் செயல்திறனும், பொருத்தமான பழச்சாறுகளின் விளைச்சலும், பயன்படுத்தப்படும் அளவுருக்கள் மற்றும் பொருளின் பண்புகளைச் சார்ந்துள்ளன. அதிக செலவுகள், சில உணவுப் பொருட்களின் தரத்தில் ஏற்படும் பாதகமான விளைவுகள் அல்லது போதுமான நொதி செயலிழப்பு இல்லாதது போன்ற காரணங்களால் இவற்றின் பரவலான பயன்பாடு கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது.13,14
பழச்சாற்றை நிலைப்படுத்தவும் தெளிவுபடுத்தவும் லக்கேஸ் பயன்படுத்தப்படலாம்.15கோக்மென் மற்றும் பலர்.16பழச்சாறுகளைத் தெளிவாக்குவதற்கு லக்கேஸைப் பயன்படுத்தப் பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. ஏனெனில், இது ஃபீனாலிக் சேர்மங்களை பாலிமர்களாகவோ அல்லது ஒலிகோமர்களாகவோ மாற்றுவதன் மூலம் திறம்பட நீக்குகிறது. இந்த பாலிமர்களை எந்தவொரு அல்ட்ராஃபில்ட்ரேஷன் சவ்வும் எளிதாக அகற்றிவிடுவதால், ஆப்பிள் சாறு 50°C வெப்பநிலையில் ஆறு வாரங்கள் வரை நிலையான நிறத்தையும் தெளிவையும் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது. சுத்திகரிக்கப்பட்ட *டிரைகோடெர்மா* லக்கேஸ், அலுமினா மணிகளில் நிலைநிறுத்தப்பட்டு, ஆப்பிள் சாற்றில் ஏற்படும் நுண்ணுயிரிக் கலப்படத்தால் உண்டாகும் விரும்பத்தகாத சுவைச் சேர்மங்களைத் தேர்ந்தெடுத்து அகற்றப் பயன்படுத்தப்பட்டது.17
ஆப்பிள் சாற்றில் உள்ள ஆவியாகும் கூறுகளில் ஏறத்தாழ 80-90% எஸ்டர்கள் மற்றும் ஆல்டிஹைடுகள் ஆகும், இவை சாற்றுக்கு ஒரு தனித்துவமான நறுமணத்தை அளிக்கின்றன.18ஆப்பிள் சாற்றைத் தெளிவாக்குவதற்காக, *டிராமெட்ஸ் வெர்சிகலர்* பூஞ்சையானது, இளந்தேங்காய் ஓடுகளிலிருந்து பெறப்பட்ட இயற்கை நாரினால் செய்யப்பட்ட மலிவான தாங்கியில் நிலைநிறுத்தப்பட்டது.19முந்தைய ஆய்வுகள், நொதியற்ற அல்லது நிலைப்படுத்தல் முறைகளைப் பயன்படுத்தியோ அல்லது மீநுண் வடிகட்டலுடன் இணைந்தோ ஆப்பிள் சாற்றின் நிறத்தை (மற்றும் கலங்கலை) நிலைப்படுத்துவது குறித்து ஆராய்ந்துள்ளன.5,19இருப்பினும், சேமிப்பின் போது ஆப்பிள் சாற்றின் இயற்பியல்-வேதியியல் பண்புகளின் மீது பூஞ்சை லக்கேஸ்களின் தாக்கம் இன்னும் தெளிவாக இல்லை. எனவே, பூஞ்சை லக்கேஸ்களைக் கொண்டு பதப்படுத்திய பின் மற்றும் இரண்டு வாரங்கள் குளிரூட்டப்பட்ட சேமிப்பிற்குப் பின், ஆப்பிள் சாற்றின் இயற்பியல்-வேதியியல் பண்புகள், ஃபீனாலிக் சேர்ம உள்ளடக்கம் மற்றும் ஆக்ஸிஜனேற்ற எதிர்ப்புச் செயல்பாடு ஆகியவற்றில் ஏற்படும் மாற்றங்களைச் சோதனை ரீதியாக ஆராய்வதே இந்த ஆய்வின் நோக்கமாக இருந்தது. லக்கேஸ்களுக்கு ஃபீனாலிக் சேர்மங்களை ஆக்ஸிஜனேற்றம் செய்யும் திறன் உள்ளது, இது சாறு தெளிவாக்குதல் உட்பட பல்வேறு தொழில்துறை செயல்முறைகளில் அவற்றைப் பயன்படுத்துவதற்கு உகந்ததாக அமைகிறது. இந்த ஆய்வு, *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ்களை ஆராய்ந்தது, குறிப்பாக சாறு தெளிவாக்குதலில் அவற்றின் செயல்பாடு மற்றும் செயல்திறனுக்கான உகந்த நிலைமைகளில் கவனம் செலுத்தியது. சிப்பி காளான்கள் (P. ostreatus NRC 620) மீதான ஆராய்ச்சி இன்னும் குறைவாகவே உள்ள நிலையில், முந்தைய ஆய்வுகள் டிராமெட்ஸ் வெர்சிகலர் மற்றும் கனோடெர்மா லூசிடம் போன்ற பல்வேறு பூஞ்சை மூலங்களிலிருந்து பெறப்பட்ட நொதிகளை ஆராய்ந்துள்ளன. இந்த நொதியின் சாத்தியமான பயன்பாட்டை உணவுத் துறையில் மதிப்பீடு செய்வதும், அதன் தனித்துவமான பண்புகளை, குறிப்பாக அதன் உகந்த pH மற்றும் வெப்பநிலையை முன்னிலைப்படுத்துவதும் இந்த ஆய்வின் நோக்கமாக இருந்தது.
2,2′-அசோஆக்சிபிஸ்(3-எத்தில்பென்சோதியாசோலின்-6-சல்பானிக் அமிலம்) (ABTS) சிக்மா-ஆல்ட்ரிச் (கனடா) நிறுவனத்திடமிருந்து வாங்கப்பட்டது. மற்ற அனைத்து வினைப்பொருட்களும் பகுப்பாய்வுத் தரத்தில் இருந்தன.
தேசிய ஆராய்ச்சி மையத்தின் நுண்ணுயிர் வளர்ப்பு சேகரிப்பு மையம், அறியப்பட்ட சிப்பி காளான் வகையான NRC620-ஐப் பெற்றது. துணை வளர்ப்பிற்குப் பிறகு, இந்த வகை 4°C வெப்பநிலையில் உருளைக்கிழங்கு டெக்ஸ்ட்ரோஸ் அகார் சாய்வுகளில் சேமிக்கப்பட்டது. தொடக்கக் கலவை தயாரிக்கும் முறை பின்வருமாறு: 10-நாள் பழமையான, முழுமையாக வளர்ந்த பூஞ்சை இழைகள் உருளைக்கிழங்கு டெக்ஸ்ட்ரோஸ் அகார் தட்டுகளில் இடப்பட்டு 28°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கப்பட்டது. 10 நாட்களுக்குப் பிறகு, 12-மிமீ விட்டம் கொண்ட மூன்று பூஞ்சை இழைக் கட்டிகள், ஒரு கிருமியழிக்கப்பட்ட உலோகத் துளைப்பான் மூலம் அகார் ஊடகத்திலிருந்து அகற்றப்பட்டு, 50 மிலி கிருமியழிக்கப்பட்ட வளர்ப்பு ஊடகம் (pH 5.0, ஓத்மான் மற்றும் குழுவினரால் முன்னர் விவரிக்கப்பட்டபடி) கொண்ட பருத்தி அடைப்பான்களுடன் கூடிய 250-மிலி எர்லன்மேயர் குடுவைகளில் வைக்கப்பட்டன.20அந்தக் கலவைகள் 28°C வெப்பநிலையில் 18 நாட்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்டன. பின்னர், அந்தக் கலவைகள் வாட்மேன் எண் 1 வடிகட்டித் தாள் வழியாக வடிகட்டப்பட்டு, அதன் விளைவாகக் கிடைத்த மேல்தேங்கிய திரவம் நொதி மூலமாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது.
ABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தி லக்கேஸ் செயல்பாடு கண்டறியப்பட்டது. வினைக்கலவை (2 மி.லி) ஆனது, 500 μL அளவுள்ள 0.3 mM ABTS (0.1 M சோடியம் சிட்ரேட் தாங்கல் கரைசலில், pH 4.5-இல் கரைக்கப்பட்டது) மற்றும் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் நீர்க்கப்பட்ட தேவையான அளவு நொதி மாதிரியையும் கொண்டிருந்தது.21,22லக்கேஸ் நொதியானது அறை வெப்பநிலையில் (28 °C ± 2) ABTS-ஐ ஆக்சிஜனேற்றம் செய்ய முடியும் என்பதைக் கருத்தில் கொண்டு, 420 nm (ε) அலைநீளத்தில் உள்ள உட்கிரகிப்புத்தன்மையின் அதிகரிப்பை அளவிடுவதன் மூலம் ABTS ஆக்சிஜனேற்றம் கண்டறியப்பட்டது.420= 36,000 செ.மீ.-1 M -1அஜிலென்ட் கேரி-100 UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் பயன்படுத்தி, ஒரு நிமிடத்திற்கு 1 μmol ABTS-ஐ ஆக்சிஜனேற்றம் செய்ய ஒரு அலகு லக்கேஸ் செயல்பாடு தேவைப்பட்டது. போவின் சீரம் அல்புமினை ஒரு உள்ளகக் கட்டுப்பாடாகப் பயன்படுத்தி, பிராட்போர்டு முறையின் மூலம் புரதச் செறிவு கண்டறியப்பட்டது.23,24
சிப்பி காளான் வகையான NRC 620-இலிருந்து நொதியைப் பெற்ற பிறகு, அதன் செயல்பாடு 28 °C வெப்பநிலையில், நிலையான சூழலில் 25 நாட்களுக்கு வெவ்வேறு சாகுபடி இடைவெளிகளில் அளவிடப்பட்டது.
லக்கேஸ் செயல்பாட்டின் மீது வெப்பநிலையின் விளைவை ஆய்வு செய்ய, 20 முதல் 90 °C வரையிலான வெப்பநிலை வரம்பில் சோதனைகள் நடத்தப்பட்டன. நொதியைச் சேர்த்து வினையைத் தொடங்குவதற்கு முன், தாங்கல் கரைசல் (0.1 M சோடியம் சிட்ரேட், pH 4.5) மற்றும் வினைபடு பொருள் (ABTS) ஆகியவை கலக்கப்பட்டு, பல்வேறு வெப்பநிலைகளில் 5 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்டன. நொதியின் வெப்ப நிலைத்தன்மை, 0.05 M சோடியம் பாஸ்பேட் தாங்கல் கரைசலில் (pH 7.0) முறையே 40, 50, 60, மற்றும் 70 °C வெப்பநிலைகளில் 2 மணி நேரம் அடைகாப்பதன் மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது. பின்னர், ABTS வினைபடு பொருளைப் பயன்படுத்தி எஞ்சிய செயல்பாடு மதிப்பிடப்பட்டது.
2.5 முதல் 7.0 வரையிலான pH வரம்பைக் கொண்ட 0.1 M சிட்ரேட்-பாஸ்பேட் இடையகங்களில், ABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தி லக்கேஸ் செயல்பாட்டின் மீது pH-இன் விளைவு மதிப்பிடப்பட்டது. pH நிலைத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்காக, நொதிக் கரைசல் 0.1 M சிட்ரேட் மற்றும் டிரிஸ் இடையகங்களில் (pH 3, 4, 6, மற்றும் 7) 40°C வெப்பநிலையில் இரண்டு மணி நேரம் அடைகாக்கப்பட்டது. அடைகாத்தலுக்குப் பிறகு, ABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகக் கொண்ட எஞ்சிய செயல்பாடு கணக்கிடப்பட்டது.
பல்வேறு உலோக அயனிகளை (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, மற்றும் Mn2+) முறையே 2.5 mM மற்றும் 10 mM செறிவுகளில் கொண்ட சோடியம் பாஸ்பேட் இடையகத்தில் (0.05 M, pH 7.0) லக்கேஸ் 10 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்டது. பின்னர், வினையைத் தொடங்குவதற்காக அடிமூலக்கூறு (ABTS) சேர்க்கப்பட்டு, அதன் சார்புச் செயல்பாடு மதிப்பிடப்பட்டது.
இயக்கவியல் அளவுருக்களை (Vmax மற்றும் Km) கண்டறிவதற்காக, பல்வேறு செறிவுகளில் (0.025–3 mM) உள்ள லக்கேஸ் நொதியால் ABTS ஆக்ஸிஜனேற்றம் pH 4.5 இல் அளவிடப்பட்டது.மாறிலிகள்வினைவேகத்தின் தலைகீழியை வினைபடு பொருளின் செறிவின் சார்பாக வரையும் லின்வீவர்-பர்க் வரைபடத்தைப் பயன்படுத்தி, மைக்கேலிஸ்-மென்டன் சமன்பாட்டின் இயக்கவியல் மாறிலிகள் கணக்கிடப்பட்டன. கிராஃப்பேட் பிரிசம் பதிப்பு 6.01 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி, லின்வீவர்-பர்க் வரைபடத்திலிருந்து இயக்கவியல் மாறிலிகள் கணக்கிடப்பட்டன.
ஆப்பிள்களைக் குழாய் நீரில் நன்கு கழுவிய பிறகு, அவை பாதியாக வெட்டப்பட்டு, முழு தானியங்கி பிரான் MP80 ஆப்பிள் சாறு பிழியும் கருவியைப் (ஜெர்மனியில் தயாரிக்கப்பட்டது) பயன்படுத்திச் சாறு பிழியப்பட்டன. அந்தச் சாறு நான்கு அடுக்கு மெல்லிய துணி வழியாக வடிகட்டப்பட்டது. கட்டுப்பாட்டுக் குழுவில் எந்த நொதிகளும் சேர்க்கப்படவில்லை, அதேசமயம் புதிதாகத் தயாரிக்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றில் 2.0% லக்கேஸ் (சோதிக்கப்பட்டவற்றில் மிகவும் பயனுள்ள செறிவு) சேர்க்கப்பட்டு, பின்னர் அது இரண்டு வாரங்களுக்கு 4°C வெப்பநிலையில் சேமிக்கப்பட்டது.
போல்டன் மற்றும் அவரது குழுவினரின் முறையின்படி, டைட்ரேட் செய்யக்கூடிய அமிலத்தன்மை (TA) மற்றும் pH ஆகியவை கண்டறியப்பட்டன.அல்.27ஒவ்வொரு மாதிரியின் pH மதிப்பும் டிஜிட்டல் pH மீட்டர் (JENWAY 3510 pH மீட்டர்) பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டது. டைட்ரேட் செய்யக்கூடிய அமிலத்தன்மை (TA), பின்வரும் சூத்திரத்தைப் பயன்படுத்தி மாலிக் அமிலத்தின் அடிப்படையில் கணக்கிடப்பட்டது.
இதில் V மற்றும் C என்பன, அளவீட்டில் பயன்படுத்தப்பட்ட சோடியம் ஹைட்ராக்சைடு கரைசலின் கன அளவு (mL) மற்றும் செறிவு (0.1 mol/L) ஆகும். K என்பது மாலிக் அமில மாற்றக் குணகம், இதன் மதிப்பு 0.067, மற்றும் W என்பது ஆப்பிள் சாற்றின் நிறை (g) ஆகும்.
மொத்த கரையக்கூடிய திடப்பொருட்கள் (டிடிஎஸ்அனைத்து சாறு மாதிரிகளின் உள்ளடக்கமும் PAL-1 பாக்கெட் ஒளிவிலகல்மானி (ATAGO, டோக்கியோ, ஜப்பான்) பயன்படுத்தி நிர்ணயிக்கப்பட்டது. ஒவ்வொரு அளவீட்டிற்குப் பிறகும், ஒளியியல் லென்ஸ் அயனியகற்றப்பட்ட நீரால் கழுவப்பட்டது, மேலும் ஒவ்வொரு ஆப்பிள் சாறு மாதிரியும் மூன்று முறை சோதிக்கப்பட்டது. மூன்று அளவீடுகளையும் சராசரி செய்வதன் மூலம் ஒவ்வொரு மாதிரிக்குமான மதிப்பு கணக்கிடப்பட்டது. இந்த முடிவுகளைச் சராசரி செய்வதன் மூலம் ஒவ்வொரு ஆப்பிள் சாறு மாதிரிக்குமான சராசரி ± திட்ட விலக்கமும் கணக்கிடப்பட்டது.
ஆப்பிள் சாறு மாதிரிகளின் மீள்-பிசுபிசுப்புத்தன்மை, ஒரு சுழல் பிசுபிசுப்புமானியை (RV, Rheotest 2, ஜெர்மனி) பயன்படுத்தி மதிப்பிடப்பட்டது. அந்த மாதிரி, பிசுபிசுப்புமானியின் “S2″ உருளைக்குள் வைக்கப்பட்டது. தோற்றப் பிசுபிசுப்புத்தன்மையானது, வெட்டு அழுத்தத்திற்கும் வெட்டு விகிதத்திற்குமான வளைகோட்டின் சாய்வால் குறிப்பிடப்பட்டது. இது, வெட்டு அழுத்தம் மற்றும் பல்வேறு வெட்டு விகிதங்களில் (1.00 முதல் 437.4 s⁻¹ வரை) உள்ள அதற்கேற்ற வளைகோடுகளிலிருந்து கணக்கிடப்பட்டது. தோற்றப் பிசுபிசுப்புத்தன்மையைக் கணக்கிடுவதற்கான சூத்திரம் பின்வருமாறு:
இதில் η என்பது தோற்றப் பாகுத்தன்மை (cP), τ என்பது வெட்டு விசை (dyn/cm²), γ என்பது வெட்டு வீதம் (sec⁻¹), மற்றும் (τ) என்பது முறுக்கு விசை (α) மற்றும் உருளை (Z) மதிப்புகளைப் பயன்படுத்தி பின்வரும் சூத்திரத்தின் மூலம் கணக்கிடப்படுகிறது: τ = Z . α.
மெய்டாவெட் முறையின்படி பழுப்பு நிறமாதல் குறியீடு நிர்ணயிக்கப்பட்டது.அல்.2910 மிலி சாறு மாதிரியானது 10 நிமிடங்களுக்கு 2750 xg வேகத்தில் மையவிலக்கம் செய்யப்பட்டது. சாற்றின் மேல்தேங்கிய திரவத்திலிருந்து 5 மிலி எடுத்து, அதனுடன் 5 மிலி 95% எத்தனால் கலக்கப்பட்டது. அந்தக் கலவையின் உட்கவர்திறன், ஷிமாட்சு புறஊதா நிறமாலைமானி (UV-1601 PC) கொண்டு 420 நானோமீட்டரில் அளவிடப்பட்டது.
போல்டன் மற்றும் குழுவினரால் விவரிக்கப்பட்டபடி, ஃபோலின்-சியோகல்டியூ வினைப்பொருளைப் பயன்படுத்தி மொத்த ஃபீனாலிக் உள்ளடக்கம் (TPC) நிறமானி முறையில் தீர்மானிக்கப்பட்டது.[270 முதல் 500 மி.கி/லி வரையிலான செறிவுகளுக்கு கேலிக் அமிலத்தின் ஒரு திட்ட வரைபடம் உருவாக்கப்பட்டது.r²= 0.997). முடிவுகள் கேலிக் அமில சமானங்களாக (mg GAE/mL) வெளிப்படுத்தப்படுகின்றன.
25 μL ஆப்பிள் சாற்றுடன் 125 μL காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரையும் 2850 μL FRAP கரைசலையும் சேர்த்து, அந்தக் கலவையை இருட்டில் வைக்கவும்.30பின்னர், ஷிமாட்சு UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் (UV-1601 PC) பயன்படுத்தி 593 nm-ல் உறிஞ்சுதலை அளவிடவும். FRAP வினைப்பொருள், 300 mM அசிடேட் பஃபர் (pH 3.6), 20 mM இரும்பு(III) குளோரைடு, மற்றும் 10 mM 2,4,6-டிரிஸ்(2-பைரிடில்)டிரையசின் (TPTZ) (40 mM HCl-ல் கரைக்கப்பட்டது) ஆகியவற்றை 10:1:1 என்ற விகிதத்தில் கலந்து தயாரிக்கப்பட்டது. டிரோலாக்ஸை தரநிலையாகப் பயன்படுத்தி ஒரு தரநிலை வளைவு உருவாக்கப்பட்டது.ஆர்²= 0.999), மற்றும் முடிவுகள் μM ட்ரோலாக்ஸ்/mL இல் வெளிப்படுத்தப்படுகின்றன.
பதப்படுத்தப்பட்ட மற்றும் பதப்படுத்தப்படாத சாறுகளின் ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட் செயல்பாடு, DPPH தனி உறுப்புகளை அகற்றும் அவற்றின் திறனை மதிப்பிடுவதற்காக DPPH முறையைப் பயன்படுத்தி நிர்ணயிக்கப்பட்டது.31பத்து மைக்ரோலிட்டர் சாறு, மெத்தனாலில் உள்ள 1 மில்லி DPPH கரைசலுடன் (100 μM) கலக்கப்பட்டது. 30 நிமிடங்கள் இருட்டில் வினைபுரிந்த பிறகு, ஷிமாட்சு UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் (UV-1601 PC) பயன்படுத்தி, அந்தக் கலவையின் உறிஞ்சுதிறன் 517 nm-ல் அளவிடப்பட்டது. அளவுத்திருத்த வளைவின் அடிப்படையில், முடிவுகள் ட்ரோலாக்ஸ் சமானங்களாக (μM ட்ரோலாக்ஸ்/மிலி) வெளிப்படுத்தப்பட்டன.R2= 0.990).
பெறப்பட்ட தரவுகளின்படி, NRC 620 சிப்பி காளான்களில் நொதித்தலின் 18-வது நாளின் முடிவில் அதிகபட்ச லக்கேஸ் உற்பத்தி காணப்பட்டது, அதன் செயல்பாடு 1302 U/L-ஐ எட்டியது. லக்கேஸ் உற்பத்திக்கான உகந்த சாகுபடி நேரத்தைத் தீர்மானிப்பதற்கு இதுவே அடிப்படையாக அமைந்தது (படம் 1). சாகுபடி நேரம் அதிகரிக்க அதிகரிக்க நொதி உற்பத்தியும் அதிகரித்தபோதிலும், அந்த அதிகரிப்பின் விகிதம் சாகுபடி நேரத்திற்கு நேர் விகிதத்தில் இருக்கவில்லை; 21 நாட்களுக்குப் பிறகு, நொதியின் செயல்பாடு 90 U/L மட்டுமே அதிகரித்து (1390 U/L-ஆக) இருந்தது. எனவே, உற்பத்தி விளைச்சலை அதிகரித்த சாகுபடி நேரத்தின் பொருளாதாரப் பலன்களுடன் சமநிலைப்படுத்த, 18 நாட்கள் இறுதியாக உகந்த சாகுபடி நேரமாகத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ் NRC 620-ல் லக்கேஸ் விளைச்சலில் சாகுபடி நேரத்தின் தாக்கம். மூன்று (12 மிமீ) பூஞ்சை மைசீலியல் கட்டிகள் 50 மிலி மலட்டு ஊடகத்தில் இடப்பட்டு, பின்னர் 28 °C வெப்பநிலையில் வெவ்வேறு நேரங்களுக்கு வளர்க்கப்பட்டன.
மற்ற ஆய்வுகளுடன் ஒப்பிடுகையில், பூஞ்சைகளால் உச்சபட்ச லக்கேஸ் சுரப்பை அடைவதற்கான உகந்த வளர்ப்பு காலம் 7 முதல் 36 நாட்களுக்கு இடையில் இருக்கக்கூடும் என்று எங்கள் முடிவுகள் சுட்டிக்காட்டுகின்றன.32எஸிகே மற்றும் பிறரின் கூற்றுப்படி33மேலும், *டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* WRF03, நொதித்தலின் ஒன்பதாவது நாளின் முடிவில், 1637 U/mg புரதம் என்ற குறிப்பிட்ட செயல்பாட்டுடன், அதிகபட்ச அளவு லக்கேஸை உற்பத்தி செய்தது.34வளர்ப்பின் ஐந்தாம் நாளில் *டிரைகோடெர்மா ஹார்சியானம்* S7113 அதிக அளவு லக்கேஸைச் சுரந்தது எனக் கண்டறியப்பட்டது. லக்கேஸ் உற்பத்தி விகிதம் பதினான்காம் நாளில் உச்சத்தை அடைந்து, பின்னர் படிப்படியாகக் குறைந்தது.34முக்கிய வளர்ச்சிக் கட்டத்தின் போதும் நொதிச் சுரப்பு ஏற்படக்கூடும் என்றாலும், அது பொதுவாக இடைநிலைக் கட்டத்தில் உச்சத்தை அடைகிறது மற்றும் ஒரு கார்பன் அல்லது நைட்ரஜன் மூலத்தின் நுகர்வால் தூண்டப்படுகிறது.34,35
ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ் NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ் நொதியானது, 50°C முதல் 80°C வரையிலான பரந்த வெப்பநிலை வரம்பில், அதன் உச்சபட்ச செயல்பாட்டை (69–98%) நெருங்கி, அதிக செயல்பாட்டைக் காட்டியபோதிலும், அதன் அதிகபட்ச செயல்பாடு 70°C-இல் காணப்பட்டது (படம் 2a). இந்த வெப்பநிலை வரம்பிற்கு வெளியே, நொதியின் செயல்பாடு சுமார் 70°C-இல் குறைந்தது. இந்த முடிவுகள், நொதியானது அதிக வெப்பநிலையிலும் செயல்படுகிறது என்பதைக் காட்டுகின்றன; இதற்குக் காரணம், அதிக வெப்பநிலை வினையின் இயக்க ஆற்றலை அதிகரிப்பதே ஆகும்.
*ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-இல் லக்கேஸ் செயல்பாட்டின் மீது வினை வெப்பநிலை (a) மற்றும் pH (b) ஆகியவற்றின் விளைவு. நொதியைச் சேர்த்து வினையைத் தொடங்குவதற்கு முன், கலவையை 5 நிமிடங்களுக்கு வெவ்வேறு வெப்பநிலைகளில் முன்கூட்டியே அடைகாப்பதன் மூலம் 20 முதல் 90 °C வரையிலான வெப்பநிலைகள் அடையப்பட்டன. லக்கேஸ் செயல்பாட்டின் மீது pH-இன் விளைவு, 2.5 முதல் 7.0 வரையிலான pH வரம்பில் 0.1 M சிட்ரேட்-பாஸ்பேட் இடையகத்தைக் கொண்ட கரைசல்களில் ABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தி மதிப்பிடப்பட்டது.
எஸிகே மற்றும் பலரின் கூற்றுப்படிஅல்.33*டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* WRF03 லக்கேஸிற்கான உகந்த வெப்பநிலை 55 °C ஆகும், இது *கனோடெர்மா லூசிடம்* இனத்திற்கான வெப்பநிலைக்குச் சமமானது.லேக்கேஸ்36மற்றும் *டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* KU-RNW02737-க்கான உகந்த வெப்பநிலை (50 °C) போன்றது.லாக்கேஸ் . பால்ட்ரியன்38மற்ற லிக்னின்-சிதைக்கும் நொதி அமைப்புகளைப் போலவே, லக்கேஸுக்கும் உகந்த வெப்பநிலை வரம்பு 50 முதல் 70 °C வரை ஆகும் என்று குறிப்பிடுகிறது.
முடிவுகளின்படி, அந்த நொதியானது pH 3.0-இல் மிக உயர்ந்த செயல்பாட்டைக் காட்டியது, மேலும் pH 3.5-இல் 94% செயல்பாட்டை எட்டியது. இருப்பினும், இது 2.5 முதல் 7.0 வரையிலான பரந்த pH வரம்பில் தொடர்ந்து செயல்பட்டது (படம் 2b). மேலும், நடுநிலை அல்லது காரச் சூழல்களுடன் ஒப்பிடும்போது, அமிலச் சூழல்களில் இது அதிக செயல்பாட்டைக் காட்டியது. இதன் செயல்பாடு 2.5 முதல் 4.5 வரையிலான pH வரம்பில் குறைந்தபட்சம் 77% ஆக இருந்தது, ஆனால் pH 7.0-இல் சுமார் 38%-ஐ மட்டுமே எட்டியது. *Trametes polyzona* WRF03-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸிற்கான உகந்த pH மதிப்பு 4.533 ஆகும், இது *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, மற்றும் *Trametes hirsuta* 41 ஆகியவற்றிலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ்களின் pH மதிப்புகளுக்குச் சமமாகும். இருப்பினும், சைரின் மற்றும் குழுவினரின் ஆய்வின்படி...42*Polymorpha f. sp.* WR710-1 இலிருந்து பெறப்படும் லக்கேஸிற்கான உகந்த pH மதிப்பு 2.2 ஆகவும், *Polymorpha f. sp.* IBL-04 இலிருந்து பெறப்படும் லக்கேஸிற்கான உகந்த pH மதிப்பு 5.043 ஆகவும் உள்ளது. நடுநிலை அல்லது கார pH நிலைகளில் லக்கேஸின் செயல்பாடு குறைவதற்கு, T2/T3 லக்கேஸின் தாமிர அணுக்களுடன் ஹைட்ராக்சைடு அயனிகள் (லக்கேஸ் தடுப்பான்) பிணைவதே காரணமாக இருக்கலாம். இது T1 மையத்திலிருந்து T2/T3 மையத்திற்கு நடைபெறும் உள் எலக்ட்ரான் பரிமாற்றத்தை சீர்குலைக்கக்கூடும், இதன் மூலம்வரம்புபடுத்தும்நொதி செயல்பாடு23,44
நொதியை வெவ்வேறு வெப்பநிலைகளில் அடைகாக்கும்போது, அடைகாக்கும் நேரமும் வெப்பநிலையும் நொதியின் நிலைத்தன்மையை பாதிப்பது கண்டறியப்பட்டது. குறிப்பாக, *டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ், 40℃ மற்றும் 50℃ வெப்பநிலைகளில் அதிக நிலைத்தன்மையைக் காட்டியது. 120 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு, அது தனது ஆரம்ப செயல்பாட்டில் முறையே 68.33% மற்றும் 59.61%-ஐத் தக்கவைத்துக் கொண்டது (படம் 3a). இதற்கு மாறாக, அதே நிலைமைகளின் கீழ் (40℃ மற்றும் 50℃, 120 நிமிடங்கள்), *டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* WRF03-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ், தனது செயல்பாட்டில் முறையே 64.38% மற்றும் 42.92%-ஐத் தக்கவைத்துக் கொண்டது.33இதற்கு மாறாக, அடைகாக்கும் நேரத்தையும் வெப்பநிலையையும் அதிகரிப்பது *டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* NRC 620 லக்கேஸின் நிலைத்தன்மையைக் குறைத்தது; 60℃ மற்றும் 70℃ வெப்பநிலையில் 60 நிமிடங்கள் அடைகாத்த பிறகு, அதன் செயல்பாடு முறையே 39.24% மற்றும் 1.72% ஆகக் குறைந்தது (படம் 3a). சோதனை முடிவுகளுக்கு இணங்க, *டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா* WRF03-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ், வெப்பச் சிகிச்சை செயல்முறை முழுவதும் 40 மற்றும் 50℃ வெப்பநிலையில் அதிக நிலைத்தன்மையைக் காட்டியது.33அதேபோல், Lueangjaroenkit etஅல்.37மற்றும் சைரின் மற்றும்அல்.42டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா KURNW027 மற்றும் டிராமெட்ஸ் பாலிசோனா WR710-1 ஆகியவற்றிலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ்களின் நிலைத்தன்மை, முறையே 50 °C வெப்பநிலையில் 1 மணி நேரத்திற்கு அறிவிக்கப்பட்டது. பல்வேறு உயிரி தொழில்நுட்பத் துறைகளில் பயன்படுத்தக்கூடிய ஒரு பயனுள்ள உயிரி வினையூக்கியாக, லக்கேஸ் ஒரு பரந்த வெப்பநிலை வரம்பில் நல்ல நிலைத்தன்மையையும் செயல்திறனையும் கொண்டிருக்க வேண்டும்.
*ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ் நொதியின் வெப்பநிலை நிலைத்தன்மை (a) மற்றும் pH நிலைத்தன்மை (b). நொதிக் கரைசலை 0.05 M சோடியம் பாஸ்பேட் தாங்கல் கரைசலில் (pH 7.0) முறையே 40, 50, 60, மற்றும் 70 °C வெப்பநிலையில் 2 மணி நேரம் அடைகாப்பதன் மூலம் வெப்பநிலை நிலைத்தன்மை மதிப்பிடப்பட்டது. நொதிக் கரைசலை 0.1 M சிட்ரேட் தாங்கல் கரைசல் மற்றும் டிரிஸ் தாங்கல் கரைசலில் (pH 3, 4, 6, மற்றும் 7) 40 °C வெப்பநிலையில் 2 மணி நேரம் அடைகாப்பதன் மூலம் pH நிலைத்தன்மை மதிப்பிடப்பட்டது. அடைகாத்தலுக்குப் பிறகு ABTS-ஐ ஒரு மூலப்பொருளாகப் பயன்படுத்தி எஞ்சிய செயல்பாடு கணக்கிடப்பட்டது.
நொதியின் பயன்பாடு மற்றும் சேமிப்பிற்கான உகந்த நிலைமைகளைத் தீர்மானிக்க, லக்கேஸ் நிலைத்தன்மையின் மீது pH-இன் விளைவை நாங்கள் ஆராய்ந்தோம். வெவ்வேறு pH மதிப்புகளுக்கு உட்படுத்தப்பட்டபோது, அது புரத அமைப்பின் நிலைத்தன்மையைக் கணிசமாகப் பாதித்தது, அதன்மூலம் நொதி மூலக்கூறின் நிலைத்தன்மை மற்றும் செயல்பாட்டையும் பாதித்தது. அமில நிலைமைகளின் கீழ் நொதி குறைந்த நிலைத்தன்மையுடன் இருந்தது என்றும், அதே சமயம் அதிக pH மதிப்புகளில் (நடுநிலை மற்றும் காரப் பகுதிகள்) அது சிறந்த நிலைத்தன்மையைக் காட்டியது என்றும் முடிவுகள் காட்டின. 7.0, 6.0, 4.0, மற்றும் 3.0 ஆகிய pH மதிப்புகளில், 120 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு நொதி தக்கவைப்பு விகிதங்கள் முறையே சுமார் 100%, 62.54%, 52.39%, மற்றும் 11.14% ஆக இருந்தன (படம் 3b). *ஸ்ட்ரோம்பஸ் மல்டிசஸ்* WRF03 லக்கேஸ் நடுநிலை pH மதிப்புகளில் (5.5–6.5) அதிக நிலைத்தன்மையையும், அமில pH மதிப்புகளில் (4.0-க்குக் கீழ்) குறைந்த நிலைத்தன்மையையும் காட்டியது. 5.5, 6.0 மற்றும் 6.5 என்ற pH மதிப்புகளில் 120 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு, நொதி தக்கவைப்பு விகிதங்கள் முறையே சுமார் 82%, 100% மற்றும் 93% ஆக இருந்தன.33கைரின் மற்றும் பலர்.42Trametes polyzona WR710-1 இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ், 6.0 முதல் 7.0 வரையிலான pH வரம்பில் நிலைத்தன்மை உடையதாக இருந்தது என்று குறிப்பிடப்பட்டது, அதேசமயம் Sayed et al.45நடுநிலை pH நிலைகளில் லக்கேஸ் அதிக நிலைத்தன்மையுடன் காணப்பட்டது. இருப்பினும், செரெனா யூனிகலரிலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ், காரத்தன்மை வாய்ந்த நிலைகளிலும் (pH 9.0) நிலைத்தன்மையைக் காட்டியது.46ஆய்வு செய்யப்பட்ட லக்கேஸ்கள் பரந்த pH வரம்பில் அதிக நிலைத்தன்மையைக் காட்டின. இது தொழில்துறை பயன்பாடுகளுக்கு ஒரு முக்கியமான பண்பாக இருக்கலாம்.
சில உலோக அயனிகள் நொதிச் செயல்பாட்டைத் தூண்டும் மற்றும் தடுக்கும் ஆகிய இருவிதமான விளைவுகளையும் கொண்டிருப்பதால், தொழில்துறைப் பயன்பாடுகளில் நொதிச் செயல்பாட்டின் மீதான அவற்றின் விளைவுகள் கருத்தில் கொள்ளப்பட வேண்டும். இது மிகவும் முக்கியமானது, ஏனெனில் உலோக அயனிகள் புறச்செல் நொதிகளின் நிலைத்தன்மையையும் தொகுப்பையும் பாதிக்கக்கூடிய பொதுவான சுற்றுச்சூழல் மாசுகளாகும்.47*ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரியேட்டஸ்* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ் நொதியின் மீது பல உலோக அயனிகளின் விளைவுகளை ஆராய்வதற்காக, நாங்கள் அதற்கேற்ற சோதனைகளை நடத்தினோம். படம் 4-இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, பயன்படுத்தப்பட்ட உலோகத்தின் வகையைப் பொறுத்து, உலோக அயனியின் செறிவை 2.5 mM-இலிருந்து 10 mM-ஆக அதிகரிப்பது நொதியின் செயல்பாட்டை எதிர்மறையாகப் பாதித்தது. உதாரணமாக,Mg²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺, மற்றும்Cu²⁺நொதியின் செயல்பாட்டைத் தூண்டி செயல்படுத்த முடியும், அதே நேரத்தில்Na⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺, மற்றும்கே⁺நொதியின் செயல்பாட்டைத் தடுக்கக்கூடும். 10 mM செறிவில், Cu²⁺ மற்றும் Mg²⁺ அயனிகள் *Pleurotus ostreatus* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ் நொதியின் செயல்பாட்டை மிகவும் சக்திவாய்ந்த முறையில் தூண்டின; அவை முறையே சுமார் 34% மற்றும் 20% தூண்டல் அளவை வழங்கின. இருப்பினும், 10 mM செறிவில், Ca²⁺ அயனிகள் லக்கேஸ் நொதியைத் தடுக்கும் மிகவும் சக்திவாய்ந்த காரணியாக இருந்தன; அவை நொதியின் செயல்பாட்டை சுமார் 60% குறைத்தன.
ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ் NRC 620 லக்கேஸின் செயல்பாட்டின் மீது உலோக அயனிகளின் விளைவு. 2.5 mM மற்றும் 10 mM செறிவுகளில் பல்வேறு உலோக அயனிகளைக் கொண்ட சோடியம் பாஸ்பேட் தாங்கல் கரைசலில் (0.05 M, pH 7.0) அந்த லக்கேஸ் 10 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்டது. பின்னர், வினைபடு பொருளை (ABTS) சேர்ப்பதன் மூலம் வினை தொடங்கப்பட்டது, அதன் பிறகு சார்புச் செயல்பாடு அளவிடப்பட்டது.
Mg²⁺ மற்றும் Cu²⁺ ஆகியவை *Trametes polyzona* WRF03³-இன் செயல்பாட்டை மேம்படுத்துகின்றன என்று கண்டறிந்த மற்ற ஆசிரியர்களின் முடிவுகளுடன் எங்கள் முடிவுகள் ஒத்துப்போகின்றன. Castaño et al.⁴⁸, *Xylaria* sp.-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ், தாமிர அயனிகளால் (Cu²⁺) ஓரளவிற்குத் தூண்டப்படுகிறது என்று கண்டறிந்தனர். மேலும், Foroutanfar et al.⁴⁹ மற்றும் Si et al.⁵⁰ ஆகியோர் முறையே *Paraconiothyrium variabile* மற்றும் *Trametes pubescens*-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸ்கள் மீது இதேபோன்ற ஆய்வுகளை மேற்கொண்டனர். இந்த நொதியின் வகை II தாமிர-பிணைப்புத் தளம் (T2), ஒரு குறிப்பிட்ட செறிவில் Cu²⁺-ஆல் நிறைவுறச் செய்யப்படலாம், இது அதிக Cu²⁺³⁹ செறிவுகளில் லக்கேஸ் செயல்பாட்டின் தூண்டுதலை விளக்கக்கூடும். வெள்ளை அழுகல் பூஞ்சை லக்கேஸ்கள் பல செப்பு அணுக்களைக் கொண்ட ஆக்சிடேஸ்கள் என்பதால், லக்கேஸ் செயல்பாட்டின் மீதான செப்பு அயனிகளின் விளைவுகள் தூண்டுதல், தடுப்பு முதல் நடுநிலை வரை பலதரப்பட்டவையாக உள்ளன.⁵¹ இதற்கு மாறாக, Zhou et al. [52]தெரிவிக்கப்பட்டதுCu²⁺தைவான் நிலத்தடி கரையான் (Odontotermes formosanus) இன் லக்கேஸ் செயல்பாட்டைத் தடுத்தது. இருப்பினும், Cerena sp. HYB07 இன் லக்கேஸ்கள்[53]மற்றும் கிளிட்டோசைப் மேக்சிமா[54]தாமிர அயனிகளால் பாதிக்கப்படவில்லை.
அடி மூலக்கூறு சிறப்புத்தன்மை அதன் இயக்கவியல் அளவுருக்களால் (Km மற்றும் Vmax) குறிப்பிடப்பட்டது; நொதியுடன் அடி மூலக்கூறின் பிணைப்பு நாட்டம் எவ்வளவு வலிமையாக இருக்கிறதோ, அவ்வளவு குறைவாக Km மதிப்பும், அவ்வளவு அதிகமாக அடி மூலக்கூறு சிறப்புத்தன்மையும் இருக்கும்.3,21,55*ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸின் இயக்கவியல் அளவுருக்கள் (Km மற்றும் Vmax), கிராஃப்ட் பேட் பிரிசம் 6.0 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி லின்வீவர்-பர்க் வரைபடத்தை (படம் 5) வரைவதன் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்டன. ABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தியபோது, முடிவுகள் 1.99 mM மற்றும் 16217 μmol ஆக இருந்தன.min⁻¹ L⁻¹,முறையே. எல்சயீத் மற்றும் பலர்.21ABTS ஆக்சிஜனேற்றத்திற்கான Km மதிப்புகள் முறையே 0.1 mM மற்றும் 0.064 mM ஆக இருந்ததாகத் தெரிவிக்கப்பட்டது, இது Lac A மற்றும் Lac B ஐசோஎன்சைம்களுக்கு ABTS மீது அதிக நாட்டம் இருப்பதைக் குறிக்கிறது. மேலும், Vmax மதிப்புகள் 0.182 μmol ஆக இருந்தன.min⁻¹மற்றும் 0.603 μmolmin⁻¹முறையே. பெறப்பட்ட Km மதிப்பு Trametes polyzona WRF03-இன் மதிப்பை (8.66 mM) விடக் குறைவாக இருந்தது; மேலும், அவற்றின் Vmax மதிப்பும் (1429 mmol min⁻¹) குறைவாக இருந்தது.குறைவானABTS-ஐ ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தும்போது.33 இதேபோல், Lentinus squarrosulus MR13 மற்றும் Trametes sp. AH28-2 லக்கேஸ் செறிவுகளின் Km மதிப்புகள் முறையே 0.0714 mM மற்றும் 0.025 mM ஆகவும், Vmax மதிப்புகள் 0.0091 mM min−1 மற்றும் 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS-ஐப் பொறுத்து) ஆகவும் இருந்தன.முறையே.56,57
*ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸின் செயல்பாட்டின் மீது ABTS செறிவின் விளைவு ஆராயப்பட்டது, மேலும் ஆரம்ப வினை வேகத்தின் தலைகீழ் மதிப்புக்கும் ABTS செறிவுக்கும் இடையிலான ஒரு லின்வீவர்-பர்க் வரைபடம் வரையப்பட்டது. இயக்கவியல் அளவுருக்களை (Vmax மற்றும் Km) கண்டறிவதற்காக, வெவ்வேறு செறிவுகளில் (0.025–3.0 mM) உள்ள லக்கேஸுடன் ABTS-இன் ஆக்சிஜனேற்ற வினையானது pH 4.5-இல் அளவிடப்பட்டது. வினை வேகத்தின் தலைகீழ் மதிப்புக்கும் அடி மூலக்கூறு செறிவுக்கும் இடையிலான லின்வீவர்-பர்க் வரைபடத்தைப் பயன்படுத்தி மைக்கேலிஸ்-மென்டன் இயக்கவியல் மாறிலிகள் கணக்கிடப்பட்டன. கிராஃப்பேட் பிரிசம் 6.01 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி லின்வீவர்-பர்க் வரைபடத்திலிருந்து இயக்கவியல் மாறிலிகள் கணக்கிடப்பட்டன.
பெக்டினேஸ்கள் போன்ற பாரம்பரிய தெளிவாக்கும் நொதிகள், பெக்டிக் பொருட்களை நீராற்பகுத்து, பாகுத்தன்மையையும் கலங்கலையும் குறைக்கின்றன. அவை கட்டமைப்பு பாலிசாக்கரைடுகளைத் திறம்பட சிதைப்பதோடு, விளைச்சலையும் தெளிவையும் மேம்படுத்துவதற்காக, செல்லுலேஸ்கள் மற்றும் ஹெமிசெல்லுலேஸ்கள் போன்ற பிற நொதிகளுடன் இணைந்தும் அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படுகின்றன. இருப்பினும், பெக்டினேஸ்கள் குறிப்பாக ஃபீனாலிக் சேர்மங்களைக் குறிவைப்பதில்லை; ஆப்பிள் மற்றும் திராட்சை சாறு போன்ற சாறுகளில், கலங்கல் மற்றும் ஆக்சிஜனேற்ற பழுப்பு நிறமாதலுக்கு இந்த ஃபீனாலிக் சேர்மங்களே முக்கியக் காரணிகளாகும்.58இதற்கு மாறாக, லக்கேஸ்கள் ஃபீனாலிக் சேர்மங்களின் ஆக்சிஜனேற்றத்தை வினையூக்கி, அவற்றை பெரிய, கரையாத மூலக்கூறுகளாகப் பாலிமரைஸ் செய்கின்றன. இந்த மூலக்கூறுகளை வீழ்படிவாக்குதல் அல்லது வடிகட்டுதல் மூலம் அகற்ற முடியும். இந்த செயல்முறை, ஃபீனாலிக் சேர்மங்களால் ஏற்படும் ஆக்சிஜனேற்ற பழுப்பு நிறமாதல் வாய்ப்பைக் குறைப்பதன் மூலம், சாற்றின் தெளிவை மேம்படுத்துவதோடு மட்டுமல்லாமல், அதன் சேமிப்புக் காலத்தையும் நீட்டிக்கிறது. மேலும், லக்கேஸ் அடிப்படையிலான தெளிவாக்கும் செயல்முறைகளை மிதமான பதப்படுத்தும் சூழ்நிலைகளில் (pH 3.5–5.5, வெப்பநிலை 25–40 °C) மேற்கொள்ள முடியும். இதனால், அவை சாறுகளின் ஊட்டச்சத்து அல்லது சுவை சார்ந்த பண்புகளைப் பாதிக்காமல், மென்மையான சாறுகளுக்கு ஏற்றதாக அமைகின்றன.59பெக்டினேஸ் சிகிச்சையானது 1–2 மணி நேரத்தில் சாற்றைத் தெளிவாக்க முடியும் என்றும், அதே சமயம் லக்கேஸ் சிகிச்சையானது ஃபீனாலிக் சேர்மங்களை முழுமையாகக் குறைப்பதற்குப் பொதுவாக நீண்ட வினை நேரத்தை (3–6 மணிநேரம்) கோருகிறது என்றும் ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன. இருப்பினும், நொதியை அசையாமல் நிலைநிறுத்துவதன் மூலமோ அல்லது லக்கேஸை இயந்திரமுறைத் தெளிவாக்கல் முறைகளுடன் இணைப்பதன் மூலமோ இந்தச் செயல்முறையை உகந்ததாக்க முடியும்.60இந்த ஆய்வில், கச்சாச் சாற்றின் நொதிப் பகுப்பாய்வு, குறிப்பிடத்தக்க லக்கேஸ் மற்றும் α-அமைலேஸ் செயல்பாடுகளை வெளிப்படுத்தியது; அதே சமயம், பெக்டினேஸ் மற்றும் சைலானேஸ் செயல்பாடுகள் மிகக் குறைவாக இருந்தன, மேலும் செல்லுலேஸ் செயல்பாடு கண்டறியப்படவில்லை. எனவே, கலங்கல் தன்மை மற்றும் ஃபீனாலிக் உள்ளடக்கத்தில் ஏற்பட்ட குறைவானது முக்கியமாக லக்கேஸின் செயல்பாட்டினால் ஏற்பட்டது, அதேசமயம் பாகுத்தன்மையில் ஏற்பட்ட மாற்றம் பகுதியளவு அமைலேஸின் செயல்பாட்டினாலும் இருக்கலாம்.
அட்டவணை 1, புதிதாகப் பிழியப்பட்ட ஆப்பிள் சாறு மற்றும் லக்கேஸ் நொதியால் பதப்படுத்தப்பட்ட மாதிரிகளின் இயற்பியல்-வேதியியல் பண்புகளைக் காட்டுகிறது. புதிதாகப் பிழியப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றின் விளைச்சல் (71.59%), லக்கேஸ் நொதியால் பதப்படுத்தப்பட்ட மாதிரிகளின் விளைச்சலை (87.34%) விடக் குறைவாக இருந்தது என்பதை முடிவுகள் காட்டின. இந்த முடிவுகள் பில்னிக் மற்றும் ஆரஞ்சு ஆகியோரின் கண்டுபிடிப்புகளுடன் ஒத்துப்போகின்றன.61பழங்களைப் பதப்படுத்துவதில் நொதிகளைப் பயன்படுத்துவது, சாறு மகசூலை அதிகரிக்கவும், வடிகட்டுதலை மேம்படுத்தவும், செறிவூட்டலுக்காக உயர்தரமான, தெளிவான சாற்றைப் பெறவும் உதவும் என்று அவர் குறிப்பிட்டார். சாறு மகசூல் அதிகரிப்பதற்கு முக்கிய காரணம், சாற்றில் உள்ள கரையக்கூடிய சர்க்கரைகளின் அளவு அதிகரிப்பதே ஆகும். பழங்களின் நொதிவழி நீராற்பகுப்பின் போது, பொருளின் செல் சுவர்களில் உள்ள மீசோக்ளியா மற்றும் பெக்டின் ஆகியவை அழிக்கப்பட்டு, நடுநிலை சர்க்கரைகள் மற்றும் அமிலங்கள் போன்ற கரையக்கூடிய பொருட்களாக மாற்றப்படுகின்றன.62.நொதி சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றின் pH மதிப்பு, கட்டுப்பாட்டுக் குழுவை விட குறிப்பிடத்தக்க அளவில் குறைவாக இருந்தது (P < 0.05), மேலும் சேமிப்பின் போது இரு குழுக்களின் pH மதிப்பும் குறிப்பிடத்தக்க அளவில் அதிகரித்தது (அட்டவணை 1). இந்த முடிவுகள் மார்க் மற்றும் குழுவினரின் முடிவுகளுடன் ஒத்துப்போகின்றன.63வெப்பச் சிகிச்சைக்குப் பிறகு சேமித்து வைத்த பின்னர் முந்திரிப் பழச்சாற்றின் pH அளவு குறைந்ததாக அவர் குறிப்பிட்டார். நொதிச் சிகிச்சைக்குப் பிறகு பெக்டின் சிதைவு மற்றும் கேலக்டூரோனிக் அமில உருவாக்கம் ஆகியவை சேமிப்பின் போது pH அளவு அதிகரிப்பதற்குக் காரணமாக இருக்கலாம். நொதிச் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட மாதிரிகளின் pH அளவு சேமிப்புக் காலம் முழுவதும் 4.05 முதல் 4.31 வரை இருந்தது, அதேசமயம் சிகிச்சை அளிக்கப்படாத ஆப்பிள் சாற்றின் pH அளவு 4.12 முதல் 4.33 வரை இருந்தது.
பதப்படுத்தப்படாத மற்றும் லக்கேஸ் கொண்டு பதப்படுத்தப்பட்ட மாதிரிகள் இரண்டின் மொத்த அமிலத்தன்மையும் (TA), சேமிப்புக் காலம் அதிகரிக்க அதிகரிக்கக் குறையும் போக்கைக் காட்டியது (அட்டவணை 1). இந்த அமிலத்தன்மைக் குறைவானது, சாறு சேமிப்பின் போது கரிம அமிலங்கள் கார்போஹைட்ரேட்டுகளாக மாறுதல் அல்லது நொதி வினைகள், அத்துடன் ஆக்ஸிஜனேற்றம் ஆகியவற்றால் ஏற்பட்டது.64கட்டுப்பாட்டு ஆப்பிள் சாறு மற்றும் நொதி சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட மாதிரிகளின் மொத்த அமிலத்தன்மை, மற்ற சாறுகளை (ஸ்ட்ராபெர்ரி சாறு 0.9%, பிளம் சாறு 2.2%, கும்காட் சாறு 1.0%, ஆப்ரிகாட் சாறு 2.4%, ஆரஞ்சு சாறு 0.8%) விடக் குறைவாகவும், ஆனால் மற்ற சாறுகளின் (எ.கா., பேரிக்காய் சாறு 0.3%) அமிலத்தன்மைக்குச் சமமாகவும் இருந்தது.62பதப்படுத்தப்படாத, புதிதாகப் பிழியப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றில் காணப்படும் இந்த வேறுபாடுகள், பயிர் வளரும் சூழல்கள், மரபியல் காரணிகள், முதிர்ச்சி நிலை மற்றும் பதப்படுத்தும் முறைகள் போன்ற பல்வேறு காரணிகளால் ஏற்படலாம்.65கட்டுப்பாட்டு மற்றும் லக்கேஸ்-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாறுகளில் மொத்த அமிலத்தன்மை குறைந்திருப்பது, சிங் மற்றும் குழுவினரால் முன்வைக்கப்பட்ட முடிவுகளுடன் ஒத்துப்போகிறது.6674 நாட்கள் சேமிப்பிற்குப் பிறகு ஜின் நுவோ ஆப்பிள் சாற்றின் மொத்த அமிலத்தன்மை குறைவது குறித்து. மறுபுறம், ஓஷ்மியான்ஸ்கி மற்றும் வோஜ்டைலோ67பாரம்பரிய தெளிவாக்கும் முறைகளின் விளைவை ஆய்வு செய்தபோது, ஆப்பிள் சாற்றின் அமிலத்தன்மையில் குறிப்பிடத்தக்க மாற்றங்கள் எதுவும் காணப்படவில்லை.
அட்டவணை 1-இல் வழங்கப்பட்டுள்ள முடிவுகள், லக்கேஸ் நொதியால் பதப்படுத்தப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றின் மொத்தக் கரையக்கூடிய திடப்பொருட்களின் (TSS) மதிப்பு, பதப்படுத்தப்படாத மாதிரியின் மதிப்பை விட அதிகமாக இருந்ததைக் காட்டுகின்றன. இந்த முடிவுகள் வெளியிடப்பட்ட ஆய்வுகளுடன் ஒத்துப்போகின்றன.68மேலும், அட்டவணை 1-இன்படி, கட்டுப்பாட்டுக் குழுவின் ஆப்பிள் சாற்றின் மொத்தக் கரையக்கூடிய திடப்பொருட்களின் (TSS) மதிப்பு ஆரம்பக் கட்டத்தில் 9.58 ஆக இருந்து, சேமிப்புக் காலத்தின் முடிவில் 11.05-ஐ எட்டியது. இந்த மதிப்புகள், ஹமீத் மற்றும் குழுவினரால் அறிவிக்கப்பட்ட புதிய ஆப்பிள் சாற்றின் TSS மதிப்புகளை விடக் குறைவாக உள்ளன.69(முறையே 11.2 மற்றும் 11.80). லக்கேஸ் நொதியால் பதப்படுத்தப்பட்ட ஆப்பிள் சாறு மாதிரிகளின் மொத்தக் கரையக்கூடிய திடப்பொருட்களின் (TSS) மதிப்பு, 4°C வெப்பநிலையில் இரண்டு வார சேமிப்பிற்குப் பிறகு, 11.23-இல் தொடங்கி 12.93-ஐ எட்டி, குறிப்பிடத்தக்க அளவில் அதிகரித்தது (அட்டவணை 1). சேமிப்பின் போது TSS-இல் இதே போன்ற அதிகரிப்பு சிட்ரஸ் பழங்கள், எலுமிச்சை மற்றும் இனிப்பு ஆரஞ்சு ஆகியவற்றிலும் காணப்பட்டது. சேமிப்பின் போது மொத்தக் கரையக்கூடிய திடப்பொருட்களின் (TSS) அதிகரிப்பு, பாலிசாக்கரைடுகள் (ஸ்டார்ச்) மோனோசாக்கரைடுகளாக (சர்க்கரைகள்) நீராற்பகுக்கப்படுதல், சாறு நீர்நீக்கம் அடைவதால் செறிவு அதிகரித்தல், மற்றும் சாற்றில் உள்ள பெக்டின் கரையக்கூடிய திடப்பொருட்களாகச் சிதைவடைதல் ஆகியவற்றால் ஏற்படலாம். மொத்தக் கரையக்கூடிய திடப்பொருட்களின் (TSS) அதிகரிப்பு, கரையக்கூடிய சர்க்கரைகளின் அதிகரிப்பால் ஏற்பட வாய்ப்புள்ளது. இந்த சர்க்கரைகள், ஹமீத் மற்றும் குழுவினரால் தெரிவிக்கப்பட்டபடி, பெக்டின் அல்லது செல்லுலோஸ் முறையே பெக்டின் அல்லது செல்லுலேஸ் நொதிகளால் கரையக்கூடிய சர்க்கரைகளாக மாற்றப்படுவதாலோ அல்லது ஸ்டார்ச் சர்க்கரைகளாக நீராற்பகுக்கப்படுவதாலோ உருவாகலாம்.69.ஆப்பிள் சாற்றின் பண்புகளின் மீது லக்கேஸின் விளைவை நேரடியாகக் காண முடியும். ஏனெனில், லக்கேஸ் சேர்க்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாறு, சேர்க்கப்படாத சாற்றை விட சிறந்த பாயும் தன்மையையும் குறைந்த பாகுத்தன்மையையும் வெளிப்படுத்துகிறது. இந்த அவதானிப்பு அட்டவணை 1-இல் பதிவு செய்யப்பட்டுள்ளது; நொதி சேர்க்கப்பட்ட மாதிரியின் பாகுத்தன்மை 1.87 cP ஆகவும், கட்டுப்பாட்டு மாதிரியின் பாகுத்தன்மை 2.95 cP ஆகவும் இருந்தது. பாகுத்தன்மையில் ஏற்பட்ட இந்த குறிப்பிடத்தக்க குறைவானது, பெக்டின் போன்ற பொருட்களின் அதிக நீர் தேக்கும் திறன் மற்றும் ஒரு ஒத்திசைவான வலைப்பின்னல் கட்டமைப்பின் உருவாக்கம் ஆகியவற்றால் ஏற்பட்டிருக்கலாம்.
இந்த ஆய்வில், நிறமாலைமானியைப் பயன்படுத்தி 420 nm-ல் உறிஞ்சுதலை அளவிடுவதன் மூலம், ஆப்பிள் சாற்றின் பழுப்பு நிறமாதல் குறியீட்டின் (BI) மீது லக்கேஸின் விளைவு ஆராயப்பட்டது. முடிவுகள் அட்டவணை 1-ல் காட்டப்பட்டுள்ளன. சேமிப்பின் போது, லக்கேஸ் பயன்படுத்தப்பட்ட மற்றும் பயன்படுத்தப்படாத ஆகிய இரண்டு குழுக்களிலும் உள்ள ஆப்பிள் சாறு மாதிரிகளின் பழுப்பு நிறமாதல் குறியீடு படிப்படியாக அதிகரிக்கும் போக்கைக் காட்டியது. பழுப்பு நிறமாதலின் அளவை BI பிரதிபலிக்கிறது மற்றும் இது ஒரு அளவுகோலாகப் பயன்படலாம்.ஒரு முக்கியமானநொதி மற்றும் நொதியற்ற பழுப்பு நிறமாக்கல் வினைகளின் காட்டி. சேமிப்பின் போது உறிஞ்சும் தன்மை குறிப்பிடத்தக்க அளவில் அதிகரித்தது (P < 0.05). சேமிப்பின் முடிவில்,ஏ420கட்டுப்பாட்டுக் குழு மற்றும் நொதி சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட குழுவில் உள்ள ஆப்பிள் சாறு மாதிரிகளின் மதிப்பு முறையே சுமார் 217% மற்றும் 121% அதிகரித்தது (அட்டவணை 1). நொதி சிகிச்சையானது பழுப்பு நிறமாகும் அளவை சுமார் 56% திறம்படக் குறைக்க முடியும் என்பதை இந்த முடிவுகள் காட்டுகின்றன. பெசெர்ரா மற்றும் குழுவினரின் முடிவுகள்...[19] எங்கள் முடிவுகளுடன் ஒத்துப்போகின்றன; அவர்கள் ஆப்பிள் சாற்றைத் தெளிவுபடுத்துவதற்காக லக்கேஸ்-குளூட்டரால்டிஹைட்-தேங்காய் நார் கலவையைப் பயன்படுத்தினர், இது அதன் அசல் நிறத்தை 61% குறைத்தது.
பழச்சாறுகளில் உள்ள பாலிஃபீனால்கள் மனித உடலுக்கு நேர்மறையான ஊட்டச்சத்து மற்றும் மருத்துவப் பலன்களை அளித்தாலும், அவை புரதங்களுடன் வினைபுரிந்து, சாற்றில் கலங்கல், வண்டல் படிதல் அல்லது தெளிவின்மையை ஏற்படுத்தி, அதன்மூலம் அப்பொருளின் சுவையையும் நறுமணத்தையும் மாற்றி, அதன் சேமிப்புக் காலத்தையும் குறைக்கக்கூடும்.71ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ் NRC 620-இலிருந்து பெறப்பட்ட லக்கேஸைப் பயன்படுத்தி ஆப்பிள் சாற்றில் உள்ள ஃபீனாலிக் சேர்மங்களின் அளவைப் பாதுகாப்பாகக் குறைப்பதே இந்த ஆய்வின் நோக்கமாக இருந்தது. அட்டவணை 1-இல் வழங்கப்பட்டுள்ள முடிவுகள், லக்கேஸ் கொண்டு பதப்படுத்தப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றில் உள்ள மொத்த ஃபீனாலிக் சேர்மங்களின் அளவு, 4 °C வெப்பநிலையில் சேமிப்பதற்கு முன்பு குறிப்பிடத்தக்க அளவில் குறைக்கப்பட்டதைக் காட்டுகின்றன. மேலும், ஆய்வு செய்யப்பட்ட இரண்டு மாதிரிகளிலும் சேமிப்பின் போது மொத்த ஃபீனாலிக் சேர்மங்களின் அளவும் குறைந்தது (அட்டவணை 1). சாண்ட்ரி மற்றும் குழுவினரின் ஆய்வு.72நொதி சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாறு அதன் ஆக்ஸிஜனேற்ற எதிர்ப்புச் செயல்பாட்டையும் ஃபீனாலிக் சேர்ம உள்ளடக்கத்தையும் தக்க வைத்துக் கொள்ள முடியும் என்பதைக் காட்டியது. இருப்பினும், லெட்டெரா மற்றும் குழுவினரின் ஆய்வின் முடிவுகள்...73பூஞ்சை லக்கேஸைக் கொண்டு ஆரஞ்சு சாற்றைச் சுத்திகரிப்பதன் மூலம், அதில் உள்ள ஃபீனாலிக் சேர்மங்களின் அளவை 45% வரை குறைக்க முடியும் என்று ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன.
ஃபீனாலிக் சேர்மங்கள், தனி радиக்கல்களை அகற்றுதல், சிங்லெட் ஆக்ஸிஜனைக் குறைத்துத் தணித்தல், ஹைட்ரஜன் அணுக்களைப் பரிமாற்றம் செய்தல், மற்றும் தனி радиக்கல்களுக்கு எலக்ட்ரான்களை வழங்குதல் போன்ற பண்புகளைக் கொண்டிருப்பதாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது, இது அவற்றை ஆற்றல்மிக்க ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட்களாக ஆக்குகிறது.74எனவே, இந்த ஆய்வில், 14 நாட்கள் குளிர்சாதனப் பெட்டியில் சேமிக்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாற்றின் ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட் செயல்பாட்டின் மீது லக்கேஸின் விளைவை மதிப்பிடுவதற்கு DPPH மற்றும் FRAP அடிப்படையிலான முறைகள் பயன்படுத்தப்பட்டன (அட்டவணை 2). இரண்டு முறைகளும் சேமிப்பின் போது ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட் செயல்பாட்டில் அதிகரிப்பைக் காட்டின, இது தனித்த ஃபீனாலிக் சேர்மங்களின் அதிகரிப்பு அல்லது மில்லார்ட் வினை விளைபொருட்களின் (MRPs) உருவாக்கம் காரணமாக இருக்கலாம், மேலும் மில்லார்ட் வினை விளைபொருட்களே ஆன்டிஆக்ஸிடன்ட் செயல்பாட்டின் அதிகரிப்புக்குக் காரணமாக இருக்கக்கூடும்.75நொதியற்ற பழுப்பு நிறமாக்கல் வினைகள் (அஸ்கார்பிக் அமிலச் சிதைவு, மெய்லார்ட் வினைகள் மற்றும் சர்க்கரைகளின் அமில-ஊக்கச் சிதைவு உட்பட) பழுப்பு நிறமிகளை (மெலனாய்டின்கள்) உருவாக்குகின்றன. இடைநிலை அஸ்கார்பிக் அமிலச் சிதைவுப் பொருட்கள் மற்றும் சர்க்கரைச் சிதைவுப் பொருட்கள் (கார்பனைல் சேர்மங்கள் போன்றவை) மெய்லார்ட் வினைகள் மூலம் அமினோ அமிலங்களுடன் வினைபுரிய முடியும்.76பழங்கள் மற்றும் காய்கறிகளைச் சேமித்து வைக்கும்போது அவை பழுப்பு நிறமாவது குறித்து விரிவாக ஆய்வு செய்யப்பட்டிருந்தாலும், இந்த எதிர்வினைகள் பற்றிய நமது புரிதல் குறைவாகவே உள்ளது.77FRAP முறையுடன் ஒப்பிடுகையில், லக்கேஸ் சேர்க்கப்பட்ட ஆப்பிள் சாறு DPPH முறையில் கணிசமாகக் குறைந்த ஆக்சிஜனேற்றத் தடுப்புச் செயல்பாட்டைக் காட்டியது (அட்டவணை 2), மேலும் அனைத்து மாதிரிகளின் ஆக்சிஜனேற்றத் தடுப்புச் செயல்பாடும் சேமிப்புக் காலம் அதிகரிக்க அதிகரிக்க கணிசமாக அதிகரித்தது. இந்த ஆய்வில் ஆக்சிஜனேற்றத் தடுப்புச் செயல்பாட்டைக் கண்டறிய இரண்டு வெவ்வேறு முறைகள் பயன்படுத்தப்பட்டன, ஏனெனில் அவற்றின் கோட்பாடுகள் வேறுபடுகின்றன. DPPH முறையானது தனி மூலக்கூறுகளை நடுநிலையாக்கும் திறனை அளவிடுகிறது, அதேசமயம் FRAP முறையானது இரும்பு அயனிகளைக் குறைக்கும் திறனை அளவிடுகிறது. எனவே, ஆய்வு செய்யப்பட்ட மாதிரிகளின் ஆக்சிஜனேற்றத் தடுப்புச் செயல்பாட்டை நன்கு புரிந்துகொள்ள, அதன் செயல்பாட்டைக் கண்டறிய பல முறைகளைப் பயன்படுத்தப் பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.78
இந்த ஆய்வின் முக்கிய கண்டுபிடிப்புகளில் ஒன்று, *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* லக்கேஸ் NRC 620, 70°C வெப்பநிலையிலும் pH 3.0 மதிப்பிலும் உகந்த செயல்பாட்டைக் காட்டுகிறது என்பதாகும். சாறுகளைத் தெளிவாக்கப் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் *டிராமெட்ஸ் வெர்சிகலர்* மற்றும் *கனோடெர்மா லூசிடம்* லக்கேஸ்கள் போன்ற மற்ற பூஞ்சை லக்கேஸ்களுடன் ஒப்பிடும்போது, *பி. ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620 அதிக வெப்ப நிலைத்தன்மையையும், அதிக அமில pH மதிப்பையும் வெளிப்படுத்துகிறது. *டிராமெட்ஸ் வெர்சிகலர்* மற்றும் *கனோடெர்மா லூசிடம்* ஆகியவற்றிலிருந்து பெறப்படும் லக்கேஸ்கள் பொதுவாக 50-60°C வரம்பிலும், 3.5 மற்றும் 5.0-க்கு இடைப்பட்ட pH மதிப்புகளிலும் உகந்த செயல்பாட்டைக் காட்டுகின்றன. இந்த வேறுபாடு, குறிப்பாக குறைந்த pH மதிப்புகளில் நிலைத்தன்மை மிக அவசியமான அமிலச் சாறுகளுக்கு, சாறு தெளிவாக்கும் திறனை மேம்படுத்த உதவக்கூடும். *பி. ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-இன் தனித்துவமான பண்பு என்னவென்றால், *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620 அதிக வெப்ப நிலைத்தன்மையையும், அதிக அமில pH மதிப்பையும் வெளிப்படுத்துகிறது. ஆய்வு செய்யப்பட்ட மற்ற பூஞ்சை லக்கேஸ்களுடன் ஒப்பிடுகையில், *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620 மிகவும் சவாலான சூழ்நிலைகளிலும் திறம்பட செயல்படும் திறனைக் கொண்டுள்ளது. அதன் உயர்வான உகந்த செயல்பாட்டு வெப்பநிலை, வேகமான வினை விகிதங்கள் மற்றும் குறைக்கப்பட்ட நுண்ணுயிரிக் கலப்படம் போன்ற தொழில்துறைப் பயன்பாடுகளில் சாத்தியமான நன்மைகளைக் குறிக்கிறது. பல பழச்சாறுகளின் அமிலத் தன்மைக்கு மிகவும் பொருத்தமான அதன் குறைந்த pH, பழச்சாறு தெளிவாக்கும் செயல்முறைகளில் பயனுள்ளதாக இருக்கலாம். இந்த முடிவுகள், பெரிய அளவிலான பயன்பாட்டிற்காக மேலும் ஆய்வு செய்வதை நியாயப்படுத்துகின்றன, மேலும் *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* NRC 620-ஐ பாரம்பரிய பூஞ்சை லக்கேஸ் மூலங்களுக்கு ஒரு சாத்தியமான மாற்றாக ஆக்குகின்றன. முந்தைய ஆய்வுகளுடன் ஒப்பிடுகையில், உகந்த வெப்பநிலை 60°C மற்றும் உகந்த pH 3.0 என நாங்கள் கண்டறிந்தோம். 60°C வெப்பநிலையில் 80 நிமிடங்கள் வினைபுரிந்த பிறகு, *கனோடெர்மா லூசிடம்* லக்கேஸ் தக்கவைக்கப்பட்டது.46அதன் செயல்பாட்டின் %.79 குர்னியாவதி மற்றும் நிசெல்லின் கூற்றுப்படி80*கனோடெர்மா லூசிடம்* நொதிகள் 25°C வெப்பநிலையிலும், 5.0 முதல் 8.0 வரையிலான pH மதிப்புகளிலும் சிறந்த முதல் மிதமான நிலைத்தன்மையையும், pH 6.0 மற்றும் 10 முதல் 30°C வரையிலான வெப்பநிலைகளிலும் நிலைத்தன்மையையும் வெளிப்படுத்துகின்றன. இந்த ஆய்வில், *ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ்* நொதியின் செயல்பாட்டிற்கான உகந்த pH மற்றும் வெப்பநிலை முறையே 3.0 மற்றும் 70°C என நாங்கள் கண்டறிந்தோம். 40°C மற்றும் 50°C வெப்பநிலையில் இரண்டு மணி நேரம் அடைக்காக்கப்பட்ட பிறகு, அந்த நொதி அதன் செயல்பாட்டில் முறையே 68.33% மற்றும் 59.61%-ஐத் தக்கவைத்துக் கொண்டது. மேலும், ப்ளூரோடஸ் ஆஸ்ட்ரேட்டஸ் NRC 620 லக்கேஸ் நொதியானது 50°C முதல் 80°C வரையிலான பரந்த வெப்பநிலை வரம்பில் அதிக செயல்பாட்டை வெளிப்படுத்தியது, கிட்டத்தட்ட அதன் அதிகபட்ச செயல்பாட்டை (69%–98%) எட்டியது, இதில் அதிகபட்ச செயல்பாடு 70°C வெப்பநிலையில் காணப்பட்டது.
முடிவாக, நிலையான சூழ்நிலைகளில் பெறப்பட்ட சிப்பி காளான் லக்கேஸ் NRC620, பல்வேறு pH மற்றும் வெப்பநிலை நிலைகளில் உகந்த செயல்பாட்டையும் நிலைத்தன்மையையும் வெளிப்படுத்தியதுடன், மற்ற நொதி மூலங்களுடன் ஒப்பிடும்போது உயர்ந்த நிலைத்தன்மையையும் நிரூபித்தது. 10 mM MgSO₄ மற்றும் CuSO₄ சேர்ப்பது நொதியின் செயல்பாட்டை முறையே சுமார் 21% மற்றும் 35% அதிகரித்தது. ஆப்பிள் சாறாகப் பதப்படுத்தப்பட்டபோது, இந்த நொதி pH மற்றும் பாகுத்தன்மையைக் குறைத்தது, அதே சமயம் சேமிப்பின் போது ஃபீனாலிக் உள்ளடக்கம் சிறிதளவு மட்டுமே குறைந்தது.
இந்த முடிவுகள், உணவுத் துறையில், குறிப்பாகப் பானங்களைத் தெளிவாக்குவதில் லக்கேஸின் ஆற்றலை உறுதிப்படுத்துகின்றன. ஃபீனாலிக் சேர்மங்களைத் தனித்துவமாகச் சிதைப்பதன் மூலம், லக்கேஸ் கலங்கலைக் குறைத்துத் தெளிவை மேம்படுத்துவது மட்டுமல்லாமல், மிதமான செயல்பாட்டுச் சூழல்களிலும் பழச்சாறுகளின் தரத்தைப் பராமரிக்கிறது. ஜெலட்டின், பென்டோனைட் மற்றும் சிலிக்கா ஜெல் போன்ற பாரம்பரியத் தெளிவாக்கும் காரணிகளைப் போலல்லாமல், லக்கேஸ் கழிவுகளை உருவாக்குவதில்லை அல்லது பானங்களிலிருந்து இனிமையான நறுமணங்களை அகற்றுவதில்லை. இதனால் இது மிகவும் சுற்றுச்சூழலுக்கு உகந்த மற்றும் நீடித்த ஒரு தேர்வாக அமைகிறது. மேலும், மற்ற நொதிகள் மற்றும் வடிகட்டுதல் முறைகளுடன் ஒப்பிடும்போது, லக்கேஸ் பொருளின் தரத்தில் சமரசம் செய்யாமல், ஒரு குறிப்பிட்ட மற்றும் செலவு குறைந்த தீர்வை வழங்குகிறது.
கியோமுஹிம்போ, எச்.டி மற்றும் பிரிங்க், எச்.ஜி. தாமிரம் கொண்ட லக்கேஸ்களின் பயன்பாடுகள் மற்றும் நிலைப்படுத்தல் உத்திகள்; ஒரு மீள்பார்வை. ஹெலியான் 9, e13156 (2023).
பதிவிட்ட நேரம்: டிசம்பர் 15, 2025